近日，北京中医药大学东直门医院科研团队开展的“通过网络药理学分析和体内外实验探讨鸡骨草胶囊治疗慢性乙型肝炎的机制”的研究成果正式在《Frontiers in Pharmacology》杂志（2022年影响因子/JCR分区；5.988/Q1）上发表。

▲ 图 | 康臣玉林制药鸡骨草胶囊治疗慢性乙型肝炎研究成果荣登《Frontiers in Pharmacology》杂志

研究背景

鸡骨草胶囊内含三七、人工牛黄、猪胆汁、牛至、毛鸡骨草、白芍、红枣、栀子、茵陈等多种治肝养肝的优质中药材，可疏肝利胆、清热解毒，用于急、慢性肝炎和胆囊炎属肝胆湿热证者。另有临床研究表明，鸡骨草胶囊 可用于治疗慢性乙型肝炎，但其产生疗效的作用机制尚未完全阐明。该研究旨在通过网络药理学研究和体内、外实验，探讨鸡骨草胶囊治疗乙肝病毒感染的机制。

研究方法

本研究采用质谱（MS）技术鉴定鸡骨草胶囊的活性代谢物，并通过尾静脉高压水注射HBV复制质粒建立HBV体内复制小鼠模型。使用脂质体将质粒转染到细胞中，采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率，定量检测HBV-s抗原（HBsAg）和HBV-e抗原（HBeAg）水平，qRT-PCR和Western blot分别检测基因表达和蛋白表达；通过网络药理学研究获得鸡骨草胶囊治疗慢性乙型肝炎的关键通路和关键基因。

▲ 图 | 鸡骨草胶囊治疗慢性乙型肝炎的技术路线图

研究结果

01 鸡骨草胶囊及其含药血清分别鉴定出92个和23个化合物，两者成分进行对比分析，推测7, 3’, 4’ -三羟基黄酮、胆酸和脱氧胆酸可能是其主要活性代谢物。

▲ 图 | 鸡骨草胶囊及其含药血清的总离子色谱图

02 动物实验结果显示，鸡骨草胶囊可降低HBV体内复制小鼠血清HBsAg水平。HE染色结果显示，各组肝脏组织均无明显损伤；免疫组化（IHC）结果显示，鸡骨草胶囊干预组的肝脏组织中HBsAg表达水平明显降低。

▲ 图 | 鸡骨草胶囊加速HBV复制C57BL/6J小鼠血清和肝脏组织中HBsAg的消除

03 鸡骨草胶囊可降低HepG2.2.15和HepAD38细胞上清液中HBsAg的水平和细胞中HBx的mRNA的表达，并可抑制HepG2.2.15和HepAD38细胞的增殖，而不影响HepG2和Huh7细胞的增殖。这表明，其可直接抑制细胞内HBV的复制，进一步抑制HBV相关肝癌细胞的增殖。

▲图 | 鸡骨草胶囊体外抑制HBV的复制和HBV相关肝癌细胞的增殖

04 鸡骨草胶囊可抑制HBV质粒转染Huh7和HEK-293T细胞中HBeAg的表达，同时抑制过表达HBx的Huh7和HEK-293T细胞的增殖。这表明，鸡骨草胶囊可能依赖HBx基因的表达而抑制HBV的复制。

▲ 图 | 鸡骨草胶囊抑制HBx表达非肝细胞的增殖

05 根据对鸡骨草胶囊的UHPLC-MS/MS分析，Swiss目标预测鉴定出663个靶基因，STITCH鉴定出292个靶基因。去除重复基因后，最终共鉴定出905个靶基因。利用维恩图工具上传鸡骨草胶囊的潜在靶点和CHB的疾病靶点提取719个重叠基因（OEGs），网络药理学分析显示鸡骨草胶囊作用的关键基因主要是CASP3、CXCL8、EGFR、HSPA8、IL6、MDM2、MMP9、NR3C1、PTGS2等，这些基因之间存在一定关系。

▲ 图 | 鸡骨草胶囊治疗慢性乙型肝炎的网络药理分析

06 KEGG富集分析表明，鸡骨草胶囊潜在的靶基因主要与代谢途径、癌症途径、神经活性配体-受体相互作用等相关，关键基因主要参与癌症通路、膀胱癌中的microRNAs等。GO富集分析结果表明，鸡骨草胶囊潜在靶基因的富集生物过程主要与信号转导、蛋白磷酸化、氧化还原过程等相关，关键基因与多种GO- BP显著相关，包括凋亡过程的负调控、药物应答、细胞增殖的正调控等。基于以上发现，癌症、乙型肝炎、癌症中的microRNAs、PI3K-Akt信号转导和癌症中的蛋白多糖的途径都在潜在靶点和关键靶点中富集。由此推测，鸡骨草胶囊可能调节了CHB相关的通路，这些生物过程和信号通路可能与鸡骨草胶囊治疗慢性乙型肝炎作用有关。

▲ 图 | OGEs和关键基因的KEGG和BP功能富集

 研究结论

体内和体外实验研究表明，鸡骨草胶囊具有抑制HBV复制的作用，同时抑制HBV复制肝癌细胞系的增殖，其关键代谢产物为3’, 4’, 7-三羟基黄酮、胆酸和脱氧胆酸，作用机制可能与癌症通路、乙型肝炎、癌症中的microRNAs、PI3K-Akt信号通路和癌症通路中的蛋白聚糖有关。本研究为鸡骨草胶囊的临床应用提供了更广泛的证据支持。